Avaliação dos níveis de células Natural Killer (NK) com expressão de membrana dos receptores PD1 e Fas no sangue periférico de mulheres com câncer de mama triplo-negativo associados ao tipo de resposta a quimioterapia neoadjuvante

Abstract

Introdução: o câncer de mama triplo-negativo (CMTN) é o subtipo intrínseco mais agressivo. O tratamento da doença localmente avançada baseia-se em quimioterapia e imunoterapia neoadjuvantes, sendo a resposta patológica completa (RPC) preditora de sobrevida livre de doença. Embora infiltrado imune celular tumoral tenha impacto prognóstico favorável, faltam biomarcadores preditivos de RPC ao tratamento de quimioterapia neoadjuvante (QT neo). Objetivo: avaliar os níveis de células Natural Killer (NK) com expressão de membrana dos receptores PD1 e Fas no sangue periférico de mulheres com câncer de mama localmente avançado de subtipo triplo-negativo, e associa-los a resposta patológica completa. Métodos: foi realizado um estudo transversal e translacional incluindo 29 mulheres de 18 a 60 anos com diagnóstico de CMTN estádio III no período de março de 2015 a julho de 2017 no Hospital de Câncer de Pernambuco e Laboratório de Pesquisa Translacional do Instituto de Medicina Integral Prof. Figueira (IMIP). Um grupo controle incluiu 30 mulheres saudáveis com idades entre 18 e 60 anos, sem diagnóstico de câncer anterior ou atual e sem história familiar de câncer de mama. Amostras de sangue periférico foram coletadas antes do tratamento quimioterápico e cirúrgico. A análise dos níveis percentuais de células NK, NK Fas+ e NK PD1+ foi realizada por citometria de fluxo. Para variáveis quantitativas, inicialmente foi aplicado o teste de normalidade de Shapiro-Wilk. O teste não paramétrico de Mann-Whitney foi utilizado para comparação entre dois grupos. Para análise pareada, foi realizado o teste não paramétrico de Wilcoxon. Adotou-se nível de significância estatística p<0,05. A análise estatística foi realizada com GraphPad Prism v9.5.1. Resultados: a mediana de idade das pacientes foi de 45 anos, com a maioria com idade inferior a 50 anos (72%) e na pré-menopausa (68%). Todas as pacientes apresentavam diagnóstico histológico de carcinoma invasivo do tipo não especial, com imuno-histoquímica confirmando o subtipo intrínseco triplo-negativo, sendo a maioria grau histológico 3 (72%). Quanto ao estágio clínico (AJCC 7ª edição), o estágio IIIA foi identificado em 31% e o estágio IIIB em 69%. A maioria dos tumores tinha extensão para a parede torácica ou pele (T4; 69%) e metástases para linfonodos axilares ipsilaterais móveis (N1; 55%). Quanto à resposta patológica, 14 pacientes (48%) alcançaram resposta patológica completa (RPC), enquanto 15 pacientes (52%) não alcançaram resposta patológica completa. Níveis elevados de células NK totais, PD1+ e NK Faz+ foram observados em pacientes em comparação com o grupo controle. Níveis aumentados de células NK e níveis reduzidos de NK PD1+ foram observados após quimioterapia neoadjuvante em comparação aos níveis antes da quimioterapia (p=0,0003 e p=0,011, respectivamente). Nenhuma diferença significativa foi observada nos níveis de células NK Fas+ antes e depois da quimioterapia. Os níveis circulantes de células NK foram elevados em pacientes com estágio IIIA em comparação com o estágio IIIB. Os níveis de células NK Fas+ foram mais baixos em pacientes com estágio IIIA em comparação com o estágio IIIB. Não houve diferença significativa nos níveis de células NK PD1+ entre os grupos. Os níveis totais de células NK e NK Fas+ foram elevados em pacientes com resposta patológica completa em comparação com o grupo sem RPC. Não houve diferença nos níveis de células NK PD1+. Conclusão: nosso estudo mostrou alterações nos níveis de células NK Fas+ no sangue periférico de mulheres com CMTN associado a RPC e isso sugere que essas células podem ser potenciais biomarcadores preditores de resposta patológica completa no câncer de mama triplo negativo.

Introduction: triple-negative breast cancer (TNBC) is the most aggressive intrinsic subtype. The treatment of locally advanced disease is based on neoadjuvant chemotherapy and immunotherapy, with the complete pathological response (pCR) being a predictor of disease-free survival. Although the presence of tumor-infiltrating immune cells has a favorable prognostic impact, predictive biomarkers for pCR to neoadjuvant chemotherapy (NAC) are lacking. Objective: to analyze the levels of Natural Killer (NK) cells with membrane expression of PD1 and Fas receptors in the peripheral blood of women with locally advanced breast cancer of the triple-negative subtype and associate them with the complete pathological response. Methods: a transversal and translational study was conducted, including 29 women aged 18 to 60 years with a diagnosis of stage III TNBC between March 2015 and July 2017 in the Hospital de Cancer de Pernambuco and translational research laboratory of Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP). A control group included 30 healthy women aged 18 to 60 years with no previous or current cancer diagnosis and no family history of breast cancer. Peripheral blood samples were collected before neo-adjuvant chemotherapy and before surgery. The analysis of percentage levels of NK cells, NK Fas+, and NK PD1+ was performed by flow cytometry. For quantitative variables, the Shapiro-Wilk normality test was initially applied. The non-parametric Mann-Whitney test was used for comparison between two groups. For paired analysis, a nonparametric Wilcoxon test was performed. A statistical significance level of p<0.05 was adopted. Statistical analysis was performed with GraphPad Prism v9.5.1. Results: the median age of patients was 45 years, with the majority aged under 50 years (72%) and premenopausal status (68%). All admitted patients had a histological diagnosis of non-special type invasive carcinoma, with immunohistochemistry confirming the intrinsic triple-negative subtype, most of which were histological grade 3 (72%). As for the clinical stage (AJCC 7th edition), stage IIIA was identified in 31% and stage IIIB in 69%. Most tumors had an extension to the chest wall or skin (T4; 69%) and metastases to mobile ipsilateral axillary lymph nodes (N1; 55%). As for the pathological response, 14 patients (48%) achieved a pathological complete response (pCR), while 15 patients (52%) did not achieve a pathological complete response (non-pCR). Elevated levels of total NK, PD1+, and NK Fas cells were observed in patients compared to the control group. Increased levels of NK cells and reduced levels of NK PD1+ were observed after neoadjuvant chemotherapy (NAC) compared to levels before NAC (p=0.0003 and p=0.011, respectively). No significant difference was observed in Fas+ NK cell levels before and after NAC. Circulating NK cell levels were elevated in patients with stage IIIA compared to stage IIIB. Fas+ NK cell levels were lower in patients with stage IIIA compared to stage IIIB. There was no significant difference in PD1+ NK cell levels between groups. Total NK cell and NK Fas+ levels were elevated in patients with pathological complete response (pCR) compared to the non-pCR group. There was no difference in PD1+ NK cell levels. Conclusion: our study showed alterations in the levels of NKFas+ cells in the peripheral blood of women with TNBC associated with pCR, and this suggests that these cells may be potential biomarkers predictors of complete pathological response in triple-negative breast cancer.